針對凍融3次的Anti-ACA11樣本，除了優(yōu)化常規(guī)WB/ELISA檢測外，還可以采用?高靈敏度的靶向質(zhì)譜法?提升檢出概率，這是目前靈敏度最高的補(bǔ)充檢測方案，具體如下：

靶向選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）質(zhì)譜法

這是針對低豐度降解樣本的替代檢測方法，核心優(yōu)勢是不需要完整全長蛋白，能特異性檢測ACA11的特征肽段，哪怕蛋白已經(jīng)部分降解，只要保留特征肽段就能檢出：

?預(yù)處理簡化?：不需要富集完整膜蛋白，直接對樣本進(jìn)行酶解，將降解的蛋白切割為肽段即可上機(jī)；

?特異性強(qiáng)?：提前預(yù)設(shè)ACA11的2-3段特異性特征肽段，質(zhì)譜會(huì)針對性掃描目標(biāo)質(zhì)荷比，排除雜質(zhì)干擾；

?靈敏度更高?：比常規(guī)免疫檢測靈敏度高1-2個(gè)數(shù)量級，能檢出降解后殘留的低濃度靶標(biāo)，還能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量。

如果實(shí)驗(yàn)室沒有質(zhì)譜條件，也可以選擇?化學(xué)發(fā)光法?替代普通顯色檢測：化學(xué)發(fā)光的靈敏度比普通顯色高約10倍，能檢測到低濃度的靶標(biāo)信號，比優(yōu)化后的常規(guī)免疫檢測檢出率更高。

需要提醒的是，兩種方法都只能提升檢出概率，無法彌補(bǔ)靶標(biāo)降解帶來的偏差，結(jié)果仍需標(biāo)注樣本凍融次數(shù)帶來的不確定性。